藍(lán)耳病抗體檢測原理簡述及結(jié)果解讀
大部分感染了藍(lán)耳病病毒(PRRS)的豬在7-14天左右的范圍內(nèi)發(fā)展出抗體。少部分豬(少于5%)會(huì)延遲到21天之前發(fā)展出抗體。
這些最初產(chǎn)生的抗體指向的是藍(lán)耳病毒的N蛋白,N蛋白是藍(lán)耳病毒抗原性最強(qiáng)的蛋白。但是N蛋白抗體跟保護(hù)性沒有直接關(guān)系,因?yàn)樗鼈儧]有病毒中和能力。大部分的商業(yè)ELISA試劑盒使用N蛋白進(jìn)行診斷,一方面是因?yàn)榭梢詫?shí)現(xiàn)早期診斷。另一方面是N蛋白是I型和II型藍(lán)耳病毒的共享表位,使基于N蛋白的ELISA可以通用于兩種病毒的檢測。有些商業(yè)試劑盒增加了其他抗原如GP5,以增加檢測譜。當(dāng)前的ELISA試劑盒都無法分辨野毒和疫苗毒。
大部分的商業(yè)藍(lán)耳病ELISA使用的是間接法ELISA,也有少量使用其他方法。間接法ELISA是將病毒抗原沾在微孔板上,然后加入血清進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果的展示是通過加入連接了酶的豬IGgs抗體。加入了合適的反應(yīng)基液之后,如果發(fā)生了抗體抗原反應(yīng),酶就會(huì)存在于微孔內(nèi),那么反應(yīng)基液就會(huì)在酶的作用下變色。在這種類型的ELISA中,變色基液的顏色深度與血清中的抗體含量成正比。因此可以通過這種方法來實(shí)現(xiàn)半滴定。定量的表達(dá)方式一般是通過血清中的顏色濃度對比標(biāo)準(zhǔn)品的顏色濃度。
這里用到的也就是所謂的S/P值,具體血清的S/P值會(huì)因?yàn)樗迷噭┖械牟煌煌?,因此相互之間不能直接比較。
通常的提法是野毒感染的S/P值會(huì)比疫苗的S/P值高。這種說法一般情況下是成立的,但是有些情況下,有的野毒導(dǎo)致的S/P值比較低但是可以致病。換句話說,不能通過S/P值來預(yù)測毒力。
在一個(gè)藍(lán)耳陰性且未經(jīng)過疫苗免疫的豬群,使用ELISA方法進(jìn)行檢測時(shí),檢測效果非常理想。這種情況下S/P值通常很高,從陰性(健康)到陽性(感染)的變化非常明顯。相反,如果經(jīng)過了免疫,血清轉(zhuǎn)化就會(huì)很不明顯。實(shí)際上,有相當(dāng)一部分的經(jīng)過多次免疫的母豬,在進(jìn)行了加強(qiáng)免疫之后,也不會(huì)提高S/P值。多種原因會(huì)導(dǎo)致這種情況。
一種解釋是免疫反應(yīng)飽和,也就是說到了一個(gè)點(diǎn)之后,無論再打多少的加強(qiáng)針抗體都不會(huì)再繼續(xù)增加。另外一個(gè)原因是隨著反應(yīng)的推進(jìn),免疫優(yōu)勢抗原會(huì)發(fā)生改變。最后還有一個(gè)不能排除的原因是,經(jīng)過多次免疫之后,豬會(huì)對N蛋白無反應(yīng)(但并不表示失去免疫保護(hù))。
總之,ELISA的檢測結(jié)果一般只能用來說明豬是否已經(jīng)與藍(lán)耳病毒(疫苗毒或野毒)發(fā)生了接觸,但不能用來預(yù)測毒株的毒力以及豬是否獲得了免疫力。(文章來源網(wǎng)絡(luò))